PD-L1协同刺激分子在实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型中的表达

董万利，薛群，李敏

苏州大学附属第一医院神经内科，苏州215006

背景  多发性硬化(MS)是CD4+Th1细胞介导的中枢神经系统脱髓鞘为主的自身免疫性疾病。而T细胞的活化需要MHC-Ag-TCR第一信号和B7-CD28超家族提供的协同刺激第二信号。PD-Ll分子是新近发现的CD28超家族的负性协同刺激分子之一，主要通过PD-L1/PD-1途径在自身免疫性疾病中起较大作用。

目的  本研究旨在探讨PD-L1-PD-1途径在实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）和MS发病机制中的作用，为临床治疗MS的提供思路。

方法  1.30只小鼠按2：1随机分为实验组和对照组。实验组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG35-55）加完全弗氏佐剂制备抗原佐剂乳化物免疫C57BL/6J小鼠，百日咳毒素(BPV)尾静脉注射小鼠，对照组不做任何处理，观察两组动物发病的临床表现并进行症状分级评分，取对照组和症状明显的实验组小鼠的脊髓进行冰冻切片并行HE染色、Fast-Blue染色以鉴定模型。

2.免疫组化检测PD-L1的表达，并用流式细胞仪、Weston-Blot检测两组动物的脾细胞上PD-L1的表达。

结果  1.78%实验组小鼠出现 EAE 的临床症状，小鼠最早于抗原诱导后的第10天开始出现动作迟缓，尾部无力等症状，以后逐渐加重，有的甚至大小便失禁、死亡。对照组小鼠则无临床症状。

2.切片HE染色光镜下见实验组小鼠脊髓组织血管周围大量炎性细胞浸润，呈 “袖套”样改变，对照组小鼠未明显病理改变；Fast-Blue染色光镜下见实验组小鼠脊髓组织白质髓鞘脱失明显，对照组小鼠无此改变。

3.切片免疫组化显示实验组PD-L1的表达明显增加，流式细胞仪(Flow cytometry FCM)、Weston-Blot检测实验组动物的脾细胞上PD-L1的表达明显增加。

结  论  1.本实验建立的小鼠模型在临床表现、病理变化方面符合EAE的表现，模型稳定、可靠。

2.实验组动物的PD-L1的表达在外周脾细胞和中枢神经系统脊髓都较对照组明显增加。